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Schlussfolgerung: (beschreiben Sie das Wachstum von Anaerobier) __________________________________________ ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Mittwoch Kitt-Tarozzi.

Schlussfolgerung: (beschreiben Sie das Wachstum von Anaerobier) __________________________________________ ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Wilson-Blair Mittwoch.

Schlussfolgerung: (beschreiben Sie das Wachstum von Anaerobier) __________________________________________ ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Mittwoch Weinberg.

Schlussfolgerung: (beschreiben Sie das Wachstum von Anaerobier) __________________________________________ ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Thioglykol-Medium ("Medium zur Sterilitätskontrolle").

Schlussfolgerung: (beschreiben Sie das Wachstum von Anaerobier) __________________________________________ ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

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Milch nach Tukaev

Schlussfolgerung: (beschreiben Sie das Wachstum von Anaerobier) __________________________________________ ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Mittwoch Kitt-Tarozzi.

Schlussfolgerung: (beschreiben Sie das Wachstum von Anaerobier) __________________________________________ ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

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Tukayev Milch

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Die kulturellen Eigenschaften von Mikroorganismen sind Merkmale des Wachstums von Mikroorganismen auf einem dichten Nährmedium.

Bakteriologische Methode - die Hauptmethode zur Diagnose von Infektionskrankheiten. Beinhaltet das Pflanzen des untersuchten Materials auf Nährmedien, das Isolieren einer Reinkultur und das Identifizieren derselben (Säen auf dichten Nährmedien, flüssigen Nährmedien, Bestimmen der morphologischen, tinktoriellen, kulturellen, biochemischen, antigenen, antibiotischen Empfindlichkeit, Mikroorganismen im untersuchten Material - Bestimmung von Typ und Stamm des Mikroorganismus.)

Die Isolierung einer Reinkultur ist die Grundlage der bakteriologischen Arbeit, da es sich bei der Aktivität um ein Material handelt, das eine Mischung von Mikroorganismen enthält, und die Identifizierung einer Art möglich ist, wenn Bakterien in einer reinen, isolierten Form erhalten werden.

Um eine Reinkultur zu erhalten, müssen Zellen verschiedener Spezies voneinander getrennt werden. Durch die Methode ihrer Trennung gibt es zwei Hauptgruppen von Methoden zur Isolierung von Reinkulturen:

Methoden basieren auf mechanischer Trennung.

Methoden, die auf Unterschieden in den biologischen Eigenschaften beruhen.

Die am häufigsten verwendeten Methoden sind die mechanische Trennung von Bakterienzellen - spezielle Aussaatmethoden.

Technik der Aussaat auf einem dichten Nährmedium.

Isolierte Kolonien bekommen. Die Bildung von isolierten Kolonien wird durch mechanische Verteilung von Mikroben während der Aussaat erreicht. Es gibt verschiedene Möglichkeiten, Material zu pflanzen.

Aussaat nach der Drigalsky-Methode Mit einem Spatel in einer Petrischale auf festem Nährmedium hergestellt. Zuvor wurde ein Tropfen der untersuchten Kultur mit einer Schlaufe in die Mitte des Mediums gegeben und dann mit einem sterilen Spatel über die gesamte Oberfläche geschliffen.

Saat anstrengenden Schlaganfall Produziere eine Schleife, indem du die Peri-Tasse in 4 gleiche Quadrate unterteilst. Die Aussaat beginnt mit 1 Feld parallelen Strichen und endet in 4 Feldern.

Drain Wachstum bekommen kann verwendet werden, um die resultierende Kultur anzusammeln. Machen Sie in einem Reagenzglas mit abgeschrägtem Agar eine Schleife mit dem Material und säen Sie im Zick-Zack nach oben.

Die zweite Gruppe von Methoden zur Gewinnung von Reinkulturen von Mikroorganismen umfasst:

a) Filtern. Das zu untersuchende Material wird durch spezielle Filter mit einem bestimmten Porendurchmesser geleitet, wodurch Mikroorganismen in der Größe getrennt werden (zum Beispiel um Viren von Bakterien zu reinigen).

Biologische Isolierungsmethoden beruhen auf Unterschieden in den biologischen Eigenschaften von Mikroorganismen.

a) Schukewitsch-Methode - Das zu untersuchende Material wird in das Kondenswasser von Schrägagar eingesät, während sich die beweglichen Formen von Mikroorganismen während der Reproduktion aus Kondenswasser (Proteus vulgaris) auf die Oberfläche des Agars „kriechen“. kann eine reine Kultur bekommen.

b) Aufwärmverfahren - Erwärmen Sie das Material in einem Wasserbad für 10-15 Minuten auf 80 ° C, während die vegetativen Formen absterben und die Sporen verbleiben und keimen, wenn sie auf ein Nährmedium gesät werden (das Verfahren ermöglicht die Trennung von Sporenkulturen von nicht-sporigen).

c) Kühlmethode - Kultivierung von Mikroorganismen bei niedrigen Temperaturen. Zur Isolierung von Reinkulturen psychrophiler Bakterien (Mikroorganismen der Gattung Yersinia werden bei einer Temperatur von 5 0 C gezüchtet)

d) Bakteriostatisches Verfahren: Bei der Aussaat werden dem Ausgangsmaterial einige chemische Substanzen oder Antibiotika zugesetzt, die das Wachstum einiger Mikroorganismen hemmen, ohne andere zu beeinträchtigen (Penicillin hemmt das Wachstum von Gr + -Mikroorganismen, ohne GR- zu beeinträchtigen, 5% H)2SO4 tötet die meisten Mikroorganismen ab, ausgenommen säurebeständige (Tuberkuloseerreger)

e) Anreicherungsmethode der Aussaat auf Wahlmedien

e) Infektion von Labortieren.

Schema der Beschreibung der kulturellen Eigenschaften von Mikroorganismen:

Aussaat nach der Drigalsky-Methode.

1. Bereiten Sie 3 Petrischalen mit sterilem Nährmedium vor.

2. In die Mitte der mittleren Schleife 1 Tropfen der untersuchten Kultur geben.

3. Reiben Sie in einer Petrischale mit einem Spatel gleichmäßig einen Tropfen auf die Oberfläche des Nährmediums.

4. Übertragen Sie das Material nacheinander in die zweite dritte Petrischale, ohne den Spatel zu verbrennen.

Auf der dritten Petrischale nach der Inkubation sollten isolierte Kolonien von Mikroorganismen wachsen.

Saat anstrengenden Schlaganfall.

1. Bereiten Sie eine Petrischale mit sterilem Nährmedium vor.

2. Teilen Sie die Peri-Tasse in 4 gleiche Quadrate.

3. Die Aussaat erfolgt in einer Schleife, beginnend mit 1 Feld mit parallelen Strichen und endend mit 4 Feldern.

Tisch Methoden zur Isolierung von Reinkulturen von Mikroorganismen.

Methode zur Isolierung von Reinkulturen

Diagramm der bakteriologischen Labordiagnosemethode

Stadium I (natives Material): Mikroskopie.

Aussaat auf Anreicherungsmedien oder festen Nährmedien

Stadium II (isolierte Kolonien): Untersuchung der kulturellen, tinktoriellen und morphologischen Eigenschaften. Aussaat auf schrägem Nähragar zur Isolierung der Reinkultur

Stadium III (Reinkultur): Identifizierung der ausgewählten Kultur.

Der Abschluss der ausgewählten Kultur

1. Wofür sind Nährmedien und was sind die Hauptanforderungen an sie?

2. Welche Wahlmedien kennen Sie? Nennen Sie ihre Zusammensetzung.

3. Mit welchen Methoden werden Reinkulturen von Mikroorganismen isoliert?

4. Warum ist die bakteriologische Diagnosemethode die wichtigste bei der Diagnose von Infektionskrankheiten?

5. Nennen Sie das Grundschema der bakteriologischen Untersuchung.

6. Was bestimmt die Dauer der bakteriologischen Untersuchung?

Borisov LB, Smirnova AM, Medizinische Mikrobiologie, Virologie, Immunologie. M., Medizin. 1994

Vorobev AV, Bykov AS, Pashkov EP, Rybakova A. M. Microbiology. M., Medicine. 1998

Korotyaev A. I., Babichev S. A., Medizinische Mikrobiologie, Virologie, Immunologie. SpecLit, 2000

Borisov L. B. Leitfaden für die praktische Ausbildung in Mikrobiologie. M. 1973

Pyatkin K.N., Krivoshein Yu.S. Mikrobiologie. M., 1980

Genkel PA, Mikrobiologie mit den Grundlagen der Virologie. M., 1974.

Schlegel G. General Microbiology. M. Mir, 1982

Lektion Nummer 5 Physiologie von Mikroorganismen. Biochemische Eigenschaften von Mikroorganismen.

Ziel: Lernen, die Reinheit der ausgewählten Kultur zu bestimmen, die Nachsaatschleife durchzuführen und die Ergebnisse der Bestimmung der biochemischen Eigenschaften von Bakterien zu berücksichtigen.

Wissen: Diagramm der bakteriellen Methode zur Diagnose von Infektionskrankheiten, Methoden zum Nährstoffeintrag in die Bakterienzelle, Stoffwechselmerkmale der Bakterienzelle, Klassifizierung und Funktion von Enzymen, Methoden zur Identifizierung von Mikroorganismen.

In der Lage sein: Die biochemischen Eigenschaften von Bakterien zu beschreiben und erneut zu säen, um eine Reinkultur von Mikroorganismen zu erhalten und deren biochemische Eigenschaften zu erkennen.

Begründung des Themas: Die Untersuchung der biochemischen Eigenschaften von Mikroorganismen wird durchgeführt, um Mikroorganismen zu identifizieren, die das Hauptglied bei der Diagnose von Infektionskrankheiten sind

Fragen zum Selbststudium:

1. Kunststoff- und Energieaustausch

2. Bakteriendiät: Nährstoffzufuhrmethoden zu einer Bakterienzelle. Permeasen.

2. Bakterienzellenzyme.

3. Identifizierung und intraspezifische Typisierung.

4. Methoden zur Untersuchung der biochemischen Eigenschaften von Bakterienzellen.

1. Merkmale des Stoffwechsels einer Bakterienzelle.

2. Identifizierung von Bakterien.

3. Die Untersuchung der biochemischen Eigenschaften von Mikroorganismen.

1. Nicht "bunte Reihe" ausgesät.

2. Optionen zum Ändern der "bunten Reihe".

3. Klieglers nicht gesäte und veränderte Umgebung.

6 Mikromethode zur Untersuchung der biochemischen Eigenschaften von Bakterien. Typenschilder.

1. Um die Zusammensetzung, den Zweck und das Aussehen von Umgebungen Guiss zu studieren. Beschreiben Sie die Optionen zum Ändern der "bunten Serie". Bestimmen Sie die biochemische Aktivität verschiedener Mikroorganismen in Hiss-Medien.

2. Bewerten Sie die Ergebnisse des Screenings einer Reinkultur: Beachten Sie die Art des Wachstums und das Vorhandensein von Fremdbakterien.

3. Stellen Sie die Reinheit der ausgewählten Kultur durch Mikroskopie eines Gram-gefärbten Abstrichs sicher.

4. Legen Sie den Katalasetest auf den Objektträger.

5. Berücksichtigung der Ergebnisse der Bestimmung der biochemischen Aktivität ausgewählter Reinkulturen auf dem Kligler-Medium.

6. Beimpfen von Material auf abgeschrägtem MPA, um eine Reinkultur zu erhalten.

Stoffwechsel (metabolism) - eine Reihe von Prozessen der Umwandlung von Substanzen und Energie, die auf die Erhaltung und Reproduktion des Lebens abzielen.

Der Metabolismus der mikrobiellen Zelle ist höher als der anderer Organismen. Der Stoffwechsel kombiniert zwei Prozesse: den plastischen Stoffwechsel (Anabolismus, Assimilation) und den Energiestoffwechsel (Katabolismus, Dissimilation).

Der plastische Stoffwechsel ist ein konstruktiver Stoffwechsel, bei dem die Reaktionen der Synthese von Molekülen der Zelle eines Mikroorganismus ablaufen, die die Assimilation von Substanzen aus der Umgebung gewährleisten, die zum Aufbau von Zellstrukturen verwendet werden.

Der Energiestoffwechsel ist der Abbau von Nährstoffen (Proteine, Kohlenhydrate, Lipide usw.). Diese Prozesse können unter aeroben oder anaeroben Bedingungen auftreten. Katabolismus und Anabolismus hängen zusammen.

In einer mikrobiellen Zelle ist das Verhältnis von Oberfläche zu Masse im Vergleich zu anderen Organismen sehr hoch. Mikrobielle Zellen haben eine Vielzahl von Enzymen.

. Bewertung der biochemischen Aktivität von Bakterien anhand der folgenden Reaktionen:

Fermentation - unvollständige Spaltung des Substrats in Zwischenprodukte.

Oxidation - vollständige Spaltung des Substrats in Kohlendioxid und Wasser.

Recycling - Substrat für Wachstum nutzen.

Die traditionelle Methode zur Identifizierung durch biochemische Eigenschaften besteht darin, eine Reinkultur auf Differenzialdiagnosemedien zu säen, die bestimmte Substrate enthalten, um die Fähigkeit eines Mikroorganismus zu beurteilen, ein bestimmtes Substrat zu assimilieren oder die Endprodukte seines Metabolismus zu bestimmen.

Bestimmung der saccharolytischen Aktivität.

1. Bestimmung der biochemischen Aktivität durch Aussaat in die Umgebung der „bunten Reihe“. Die kurze „bunte Reihe“ umfasst Hisa-Flüssigkeiten mit Mono- und Disacchariden, Glucose, Lactose, Saccharose, Maltose und Mannitol. Darüber hinaus enthält die lange „bunte Reihe“ Medien mit Arabinose, Xylose, Galactose, Glycerin usw. Um die Fähigkeit von Bakterien zu beurteilen, Kohlenhydrate in die Umwelt zu fermentieren, fügen Sie den Andred-Indikator hinzu, mit dem die Bildung von sauren Spaltprodukten und einen „Schwimmer“ zur Gasdetektion nachgewiesen werden können.

2. Bestimmung der biochemischen Aktivität in Kligler-Medium. Das Kligler-Medium soll die Fermentation von Glucose, Lactose, Schwefelwasserstoff und Gasentwicklung bestimmen. In Reagenzgläser gegossen und halbiert. Das inokulierte Medium von Kligler ist rot. Wenn sich nach der Inkubation der verdrehte Teil des Mediums von rot nach gelb verfärbt, wird Laktose fermentiert. Wenn sich die Farbe der Agarsäule von rot nach gelb ändert, wird Glukose fermentiert. Wenn eine Schwärzung in der Agarsäule beobachtet wird, wird Schwefelwasserstoff freigesetzt und es findet eine Glucosefermentation statt. Befinden sich Gasblasen im Medium, wird während des Fermentationsprozesses Gas freigesetzt.

Bestimmung der proteolytischen Eigenschaften von Mikroorganismen.

Zur Bestimmung proteolytischer Enzyme wird auf Fleisch-Pepton-Gelatine kultiviert, die mehrere Tage bei Raumtemperatur inkubiert wird. In Gegenwart von proteolytischen Enzymen verflüssigen Bakterien Gelatine.

Wenn Protein zerstört wird, können Ammoniak, Indol oder Schwefelwasserstoff freigesetzt werden.

Reaktion zu Ammoniak. Einen mit dem Indikator imprägnierten Streifen Filterpapier auftragen. Bei einem positiven Ergebnis wird das Papier blau.

Reaktion auf Indol. Ehrlich-Methode: In ein Röhrchen mit Bakterienkultur werden einige Tropfen Ehrlich-Reagenz gegeben. In Gegenwart von Indol erscheint ein rosa Ring auf der Oberfläche.

Reaktion zu Schwefelwasserstoff. Sie können Filterpapier mit Eisensulfat verwenden. Wenn Schwefelwasserstoff freigesetzt wird, wird das Papier schwarz.

Katalase-Nachweis. 1-2 Tropfen einer Wasserstoffperoxidlösung werden auf einen Objektträger gegeben und eine Schleife mit der zu untersuchenden Kultur eingeführt. Die Freisetzung von Gasblasen weist auf das Vorhandensein von Katalase hin.

Bestimmung der biochemischen Aktivität von Mikroorganismen mit dem System of Indicator Papers (SIBy)

Funktionsprinzip: Scheiben aus Filterpapier, die mit Nährmedien (Nährmedium + Substrat + Indikator) gesättigt und getrocknet sind, werden in Flaschen gelagert. Im Labor werden die Scheiben in sterilen Röhrchen entsorgt und mit der Suspension der untersuchten Kultur in Kochsalzlösung gefüllt. Abgerechnet wird nach 18-24 Stunden Inkubation in einem Thermostat, um die Farbe des Indikators zu ändern.

Bestimmung der biochemischen Aktivität von Mikroorganismen unter Verwendung der Panels zur biochemischen Identifizierung.

Wirkprinzip: In den Löchern von Spezialkunststoffplatten befinden sich geeignete getrocknete Medien (Nährstoffbasis + Substrat + Indikator). Im Labor wird eine Suspension der untersuchten Kultur in die Vertiefungen gegeben und nach Inkubation (5-24 Stunden) das Ergebnis der Indikatorfarbänderung berücksichtigt.

Beispiele: Das Panel zur biochemischen Differenzierung von Enterobakterien, das Panel zur biochemischen Differenzierung von Staphylokokken.

Automatisierte Identifikationssysteme.

Das Funktionsprinzip ist das gleiche wie im vorherigen Absatz. Die Inkubation der Panels, die Aufzeichnung der Ergebnisse und die Identifizierung werden jedoch mit einem Computer durchgeführt.

Identifizierung von Bakterien anhand von biochemischen Merkmalen mit den Medien „Variegated Series“.

1. Die Reinkultur des untersuchten Mikroorganismus wird in einer Schleife in der Umgebung der "bunten Reihe" ausgesät.

2. Die Pflanzen werden 18-24 Stunden oder länger bei 37 ° C inkubiert.

3. Wenn Bakterien vor der Bildung saurer Produkte Kohlenhydrate fermentieren, ändert sich die Farbe des Mediums.

4. Bei der Zersetzung von Kohlenhydraten zu sauren und gasförmigen Produkten tritt neben einer Farbänderung eine Gasblase im Schwimmer auf.

5. Wenn Medium mit halbflüssigem Agar verwendet wird, wird die Gasbildung durch den Bruch der Säule aufgezeichnet.

Ohne Fermentation ändert sich die Farbe des Mediums nicht. Da die Bakterien nicht alle, sondern nur die für jede Art definierten Kohlenhydrate fermentieren, aus denen das Giss-Medium besteht, ergibt sich ein recht buntes Bild. Daher wird der Satz von Medien mit Kohlenhydraten und einem Farbindikator als „bunte Reihe“ bezeichnet.

Identifizierung von Bakterien anhand biochemischer Eigenschaften mit Kligler

1. Die Reinkultur des untersuchten Mikroorganismus wird mit einer Schleife auf die Kligler-Umgebung ausgesät

2. Die Pflanzen werden 18 bis 24 Stunden bei 37 ° C inkubiert.

3. Wenn Bakterien vor der Bildung saurer Produkte Laktose fermentieren, ändert sich die Farbe des Mediums im Bereich der Abschrägung von rot nach gelb.

4. Wenn Bakterien vor der Bildung saurer Produkte Glukose fermentieren, ändert sich die Farbe des Mediums im Bereich „Säule“ von rot nach gelb.

5. Für den Fall, dass Bakterien Schwefelwasserstoff absondern, wird im Bereich „Säule“ eine Änderung der Farbe des Mediums von rot nach schwarz beobachtet.

6. Bei der Zersetzung von Kohlenhydraten zu sauren und gasförmigen Produkten treten neben einer Farbänderung Gasblasen im Inneren des Mediums auf.

Ohne Fermentation ändert sich die Farbe des Mediums nicht.

1. Wozu dient die Identifizierung von Mikroorganismen?

2. Welche Identifizierungsmethoden werden in modernen bakteriologischen Labors am häufigsten angewendet?

3. Wofür wird die bunte Reihe verwendet und wie ist ihre Zusammensetzung?

4. Was sind proteolytische Eigenschaften? Wie kann ich sie identifizieren?

5. Was sind SIBs? Um zu identifizieren, welche Bakterien sie verwenden?

Borisov LB, Smirnova AM, Medizinische Mikrobiologie, Virologie, Immunologie. M., Medizin. 1994

Vorobev AV, Bykov AS, Pashkov EP, Rybakova A. M. Microbiology. M., Medicine. 1998

Korotyaev A. I., Babichev S. A., Medizinische Mikrobiologie, Virologie, Immunologie. SpecLit, 2000

Borisov L. B. Leitfaden für die praktische Ausbildung in Mikrobiologie. M. 1973

Pyatkin K.N., Krivoshein Yu.S. Mikrobiologie. M., 1980

Genkel PA, Mikrobiologie mit den Grundlagen der Virologie. M., 1974.

Schlegel G. General Microbiology. M. Mir, 1982

Lektion Nummer 6 Physiologie von Mikroorganismen. Atem von Mikroorganismen. Anaerobes. Kultivierungsmethoden. Der Einfluss von Umweltfaktoren auf Mikroorganismen. Desinfektion. Sterilisation.

Ziel: Untersuchung der Prinzipien der Schaffung von Umgebungen für Anaerobier und der Methoden ihrer Kultivierung, der wichtigsten Sterilisations- und Desinfektionsmethoden und der dafür verwendeten Ausrüstung.

Wissen: Merkmale der Atmung von Mikroorganismen, die wichtigsten Methoden zur Isolierung von Reinkulturen von Anaerobier, die Zusammensetzung der Nährmedien für das Wachstum von Anaerobier, Methoden zur Kontrolle der Desinfektion und Sterilisation.

Sie müssen in der Lage sein, die kulturellen Eigenschaften anaerober Bakterien zu beschreiben und die Desinfektions- und Sterilisationsmethode in Abhängigkeit von den Eigenschaften des Objekts zu wählen.

Begründung des Themas: Anaerobier sind die Erreger vieler Krankheiten, für deren Diagnose spezifische Anbaumethoden erforderlich sind.

Fragen zum Selbststudium:

1. Atmungsketten von Mikroorganismen.

2. Einstufung von Mikroorganismen nach Art der Atmung.

3. Eigenschaften der Nährmedien für Anaerobier.

4. Schaffung von Bedingungen für die Kultivierung von Anaerobier.

5. Methoden zur Isolierung der Reinkultur von Anaerobier.

6. Sterilisation und Desinfektion.

7. Qualitätskontrolle der Desinfektion und Sterilisation.

1. Untersuchung von Nährmedien für Anaerobier: Kita-Tarozzi-Medium, Wilson-Blair-Medium, Thioglycol-Medium, Weintberg-Medium, Zeissler-Agar, Milch nach Tukaev.

2. Beschreibung der kulturellen Eigenschaften von Anaerobier.

3. Erkundung von Möglichkeiten zur Schaffung anaerober Bedingungen.

4. Methoden der Sterilisation; Ausrüstung für die Sterilisation.

5. Desinfektionsmethoden.

6. Methoden zur Überwachung der Wirksamkeit der Sterilisation und Desinfektion.

1. Nährmedien - Kita-Tarozzi-Medium, Wilson-Blair-Medium, Thioglycol-Medium, Weintberg-Medium, Zeissler-Agar.

2. Optionen für das Wachstum von Anaeroben auf diesen Nährmedien.

3. Eksikator, Anaerostat.

4. Gerät zur Sterilisation.

1. Skizzieren und notieren Sie die Zusammensetzung und den Zweck der Nährmedien: Kita-Tarozzi-Medium, Wilson-Blair-Medium, Thioglycol-Medium, Weintberg-Medium, Tukayev-Milch, Zeissler-Agar.

2. Beschreiben Sie die Merkmale des Wachstums von Anaerobier auf Nährmedien.

3. Berücksichtigen Sie die Ergebnisse von Experimenten, die zur Kontrolle der Sterilisation durchgeführt wurden. Machen Sie eine Schlussfolgerung. Füllen Sie die Tabelle aus: Methoden zur Überwachung des Sterilisationsmodus.

4. Bestimmen Sie die antibakterielle Wirkung der UV-Strahlung auf Staphylokokken mit gebrauchsfertigen Pflanzen.

5. Füllen Sie die Tabelle aus: Grundlegende Desinfektionsmethoden und Qualitätskontrolle der Desinfektion.

6. Bewerten Sie die Ergebnisse des Pflanzens von Material auf abgeschrägtem MPA.

Nährmedium für Anaerobenzucht:

Mittwoch Wilson-Blair (Eisensulfit-Agar), hergestellt aus Nähragar, dem Glucose, Natriumsulfit und Eisenchlorid (2) zugesetzt werden. Anaerobe Clostridien auf diesem Medium bilden aufgrund der Reduktion von Natriumsulfit zu Sulfid schwarze Kolonien, die zusammen mit Eisenchlorid einen schwarzen Niederschlag ergeben.

Mittwoch Kitta-Tarozzi. Besteht aus Nährlösung, 0,5% Glukose und Leberstücken. Gießen Sie nach der Aussaat Medium mit einer kleinen Schicht Vaselineöl ein.

Thioglykol-Bouillon mit Hämin (Wahlmedium zur Kultivierung sporenbildender Anaerobier). Es besteht aus Hämin, Caseinhydrolysat, Glucose, Cystein, Natriumsulfat, Natriumchlorid und Natriumthioglykolat.

Zeissler Blutzuckeragar. Besteht aus Nähragar, 1-2% Glukose, defibriniertem Blut.

Mittwoch Weinberg. Besteht aus Nähragar, Leber, Natriumphosphat, 0,5% Glucose, Salzsäure.

Sterilisation (oblozhivaniya, "sterilis" - fruchtlos) - die vollständige Zerstörung des Objekts von allen Mikroorganismen, die sowohl vegetativ als auch sporenförmig sind. Für die Sterilisation werden hauptsächlich physikalische Methoden angewendet: Sterilisation im Trocken-Sterilisationsschrank, Dampfsterilisation, Entzunderung, Autoklavieren, Kalzinieren, Exposition gegenüber ionisierender Strahlung, Kochen. Sterilisationsmethoden

1. Physikalische Methoden. Es gibt verschiedene Sterilisationsmethoden bei hohen Temperaturen.

1. Kalzinierung in Flammen (Spirituslampe) - zum Sterilisieren von bakteriologischen Schleifen, Präparieren von Nadeln, Objektträgern, Pinzetten.

2. Kochen wird selten angewendet. Durch 10–40-minütiges Kochen in Wasser können Mehrwegspritzen und -nadeln sterilisiert werden.

3. Die Sterilisation mit trockener Hitze erfolgt in Pasteuröfen. Heute werden dazu Trockenwärmeschränke verschiedener Marken eingesetzt. Der einfachste Pasteur-Ofen besteht aus einem doppelwandigen Metallbehälter, der mit einem Thermometer zur Temperaturregelung und einem Heizelement ausgestattet ist.

Das vorschriftsmäßig vorbereitete Material wird in einen Ofen gegeben und 45 Minuten bei einer Temperatur von 165 bis 170 ° C sterilisiert. Reagenzgläser, Kolben, Flaschen mit Wattestopfen verschlossen.

4. Die Dampfsterilisation wird bei einer niedrigeren Temperatur als die Trockenhitzesterilisation durchgeführt und bei einer Temperatur von 100-120ºC.

1) Dampfsterilisation unter Druck

2) Dampfsterilisation.

Sterilisation von Dampf unter Druck - basierend auf der Tatsache, dass der entstehende Dampf nicht austritt, sondern sich auf engstem Raum ansammelt und den Druck erhöht. Dementsprechend steigt der Druck und der Siedepunkt von Wasser; mit einem Druckanstieg von 1 atm. Der Siedepunkt beträgt 120 ° bei einem Druckanstieg von 2 atm - 134,18 ° usw. Bei dieser Temperatur sterben Mikroorganismen und ihre Sporen sehr schnell ab (bei 120 ° innerhalb von 15–20 Minuten).

Mit dieser Sterilisationsmethode werden Nährmedien, Laborglaswaren, Metall- und Glasinstrumente zur Desinfektion von infektiösem Material hergestellt.

Sterilisation von Dampf unter Druck, der in Autoklaven erzeugt wird. Heute ist es die in der bakteriologischen Praxis am weitesten verbreitete Sterilisationsmethode.

Der Autoklav ist ein zylindrischer Metallbehälter mit dicken Doppelwänden und einem hermetisch geschlossenen massiven Deckel. Der Autoklav ist mit einem Manometer und einem Thermometer zur Überwachung von Druck und Temperatur ausgestattet. Unter dem Boden des Autoklaven befinden sich Heizelemente. Sterilisierte Gegenstände werden in den Behälter gegeben und der Deckel dicht verschlossen, ein Druck- und Temperaturanstieg setzt ein.

Die Sterilisation mit Flüssigdampf wird in einer Koch-Apparatur (Abb. 38) durchgeführt, bei der es sich um einen hohen Metallzylinder mit doppeltem Boden und lockerem Deckel handelt, der mit einem Thermometer ausgestattet ist. Am Boden der Apparatur wird Wasser gegossen, das vom Boden zum Kochen gebracht wird. Der entstehende Dampf wird durch die Ränder des dicht geschlossenen Deckels abgegeben. Die Sterilisation erfolgt innerhalb von 30-40 Minuten nach Ablassen des Dampfes.

Die Dampfsterilisation kann auch im Autoklaven durchgeführt werden. In diesem Fall bleibt der Deckel des Autoklaven offen und das Auslassventil ist geöffnet. Dampfsterilisierte Gegenstände, die sich durch Einwirkung von hohen Temperaturen (Nährmedium) zersetzen.

Eine einzige Behandlung mit einem flüssigen Dampf gewährleistet keine vollständige Sterilisation, da vegetative Formen bei einer Temperatur von 100 ° C absterben, jedoch keine bakteriellen Sporen. Eine vollständige Entwässerung mit Hilfe von Flüssigkeitsdampf wird durch wiederholte (fraktionierte) Sterilisation erreicht.

Fraktionierte Sterilisation Die fraktionierte Sterilisation wird auf Materialien angewendet, die Temperaturen über 100 ° C nicht vertragen (Gelatine, Milch, Nährmedien mit Kohlenhydraten). Bei einer Temperatur von 100 ° sterben die vegetativen Formen der Bakterien ab, dann können die verbleibenden Sporen zu vegetativen Formen keimen und das Material wird an einem Tag wieder bei 100 ° sterilisiert. Die verbleibenden Sporen können wieder keimen und nach einem Tag wird das Material wieder bei 100 ° sterilisiert, wodurch eine 100% ige Sterilisation erreicht wird

Tyndallisation ist eine fraktionierte Sterilisation bei niedriger Temperatur, die von Tyndall für Objekte vorgeschlagen wird, die Temperaturen von 100 ° nicht tolerieren. Sie werden täglich 5 bis 6 Tage hintereinander bei einer niedrigeren Temperatur (56 bis 60 ° C) 1 Stunde lang erhitzt. Die Entkalkung erfolgt entweder im Wasserbad oder in speziellen Geräten mit Thermostaten.

Pasteurisierung. Das von Pasteur vorgeschlagene Verfahren zur teilweisen Sterilisation von Flüssigkeiten, die unter Einwirkung von hohen Temperaturen an Qualität verlieren, wird bei der Verarbeitung von Lebensmitteln (Säfte, Milch, Wein) bei hohen Temperaturen angewendet. Die Methode basiert auf der Tatsache, dass die meisten unkontrollierten Mikroben sterben, wenn die Flüssigkeit 15 bis 30 Minuten lang auf 50 bis 60 ° C oder 5 bis 10 Minuten lang auf 70 bis 80 ° C erhitzt wird und die Sporen lebensfähig bleiben. Notwendige Voraussetzung ist daher das Verpacken und Abkühlen des pasteurisierten Produktes.

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Anhang N 3. NÄHRSTOFF-MEDIENEMPFANG

1. Das Medium zur Bestimmung von Bakterien der Gruppe der Escherichia coli

Herstellung von Lactose Pepton Medium:

a) normale Konzentration: 10 g Pepton, 5 g Natriumchlorid (NaCl), 5 g Lactose lösen sich beim Erhitzen in 1000 ml destilliertem Wasser, pH 7,4-7,6. 10 ml in Reagenzgläser füllen und im Autoklaven bei 112 Grad sterilisieren. C (0,5 kgf / cm²) 30 Minuten;

b) Aufkonzentrieren: hergestellt auf die gleiche Weise wie das Medium normaler Konzentration, jedoch unter Zugabe von destilliertem Wasser pro 1000 ml destilliertem Wasser 50 g NaCl, 50 g Lactose, 100 g Pepton.

2. Herstellung von Halbflüssigkeiten mit Laktose

In 1000 ml destilliertem Wasser werden 10 g Pepton, 5 g NaCl, 4-5 g Agar-Agar gelöst, zum Sieden gebracht, der pH wird auf 7,2-7,4 eingestellt; 1 ml einer 1,6% igen alkoholischen Lösung von Bromthymolblau zugeben. Sterilisiert bei 120 Grad. +/- 2 Grad C für 20 Minuten. 5 g Lactose werden in das geschmolzene Medium eingebracht und zum Sieden erhitzt. In sterile Röhrchen mit einer Säulenhöhe von 3 cm gegossen und bei 112 Grad sterilisiert. C (0,5 kgf / cm²) 12 Minuten. Lagerdauer nicht mehr als 2 Wochen.

Zubereitung eines halbflüssigen Mediums mit Laktose aus einer trockenen Zubereitung mit BP - gemäß dem Rezept auf dem Etikett. Haltbarkeit - nicht mehr als 7 Tage.

3. Herstellung des Endo-Mediums (Modifikation)

Aus der trockenen Zubereitung nach dem Rezept auf dem Etikett zubereitet. Tassen vor der Aussaat werden in einem Thermostat getrocknet. Haltbarkeit - nicht mehr als zwei Tage im Dunkeln. In fertig und auf 60-70 Grad abgekühlt. C-Medium vor dem Abfüllen in Tassen bis zu 20-25 ml zu 100 ml Medium geben: 0,2 ml einer 100% igen alkoholischen Lösung von basischem Fuchsin, um die Unterscheidungseigenschaften des Mediums zu verbessern, und 0,2 ml einer 5% igen alkoholischen Lösung von Rosolsäure, um ein Überwachsen zu vermeiden Pflanzen von Sporenaeroben. Tassen mit Medium müssen vor der Aussaat getrocknet werden. Die Haltbarkeit der Lösung von Fuchsin und Rosolsäure beträgt nicht mehr als einen Monat.

4. Herstellung von Lactose-Borsäure-Puffermedium

10 g Pepton, 12,2 g Kaliumphosphat disubstituiert (wasserfrei), 4,1 g Kaliumphosphat monosubstituiert (wasserfrei), 4,1 g Kaliumphosphat monosubstituiert (wasserfrei), 3,2 g Borsäure (erfordert genaues Abwiegen), 5 g Lactose werden in 1 Liter destilliertem Wasser gelöst, in Reagenzgläser mit Schwimmern in 5 ml gegossen und bei einer Temperatur von 112 Grad sterilisiert. Mit 0,5 kgf / sq. cm 12 Minuten. Haltbarkeit - nicht mehr als zwei Wochen. Es wird empfohlen, bei jeder neuen Mediumcharge den E. Coli-Stamm zu überprüfen.

5. Herstellung von Reagenzien zur Bestimmung der Oxidaseaktivität von Bakterien

30-40 mg alpha-Naphthol werden in 2,5 ml rektifiziertem Ethylalkohol gelöst, 7,5 ml destilliertes Wasser werden zugegeben und 40-60 mg Dimethylphenylendiamin werden gelöst. Die Lösung wird unmittelbar vor der Bestimmung hergestellt.

6. Kochen von Nähragar

Hergestellt aus der trockenen Zubereitung nach dem Rezept auf dem Etikett, sterilisiert bei 120 Grad. C (1 kgf / cm²) 30 Minuten.

7. Wilson-Blair Medium kochen

Zu 100 ml geschmolzen und dann auf eine Temperatur von 80 Grad abgekühlt. Bei alkalischem Nähragar mit 1% Glucose 10 ml einer 20% igen Natriumsulfitlösung und 1 ml einer 8% igen Eisen (III) -chloridlösung zugeben. Gewöhnlicher Nähragar kann verwendet werden, aber vor der Verwendung 10 ml 25% ige Glucose und 0,5 ml 10% iges Alkali zugeben. Wässrige Salzlösungen werden mit sterilem destilliertem Wasser hergestellt und eine Stunde lang mit fließendem Dampf sterilisiert. Natriumsulfit kann durch Natriumsulfat und Eisen (III) sulfat durch Sulfat ersetzt werden.

8. Vorbereitung der Umgebung für die Bestimmung von Oxidation und Fermentation (OF) (Mittwoch Hugh-Leifson)

Zu 100 ml destilliertem Wasser werden 0,2 g Pepton, 0,5 g Natriumchlorid, 0,03 g K & sub2; HPO & sub4 ;, ​​0,3 g Agar-Agar, 1 g Kohlenhydrat (Glucose, Fructose), 0,3 ml 1% ige wäßrige Lösung gegeben Bromthymolblaulösung. Das Medium kochen, bis die Zutaten vollständig aufgelöst sind, den pH-Wert auf 7,0-7,2 einstellen, 3-4 ml in Reagenzgläser gießen und bei 112 Grad sterilisieren. C (0,5 kgf / cm²) 15 Minuten. Abkühlung mit einem Pfosten.

9. Die Umgebung "Shine" und "King-A", um P. aeruginosa zu identifizieren

9.1. Mittwoch "Shine". Fleisch-Pepton steril 2% Agar 100 ml, sterile Milch abgezogen 10 ml, 10% wässrige Lösung von Triphenyltetrazolchlorid 8 ml, Argininhydrochlorid 0,3 g. Arginin, Triphenyltetrazolchlorid-Lösung zugeben (nach Lagerung selbststerilisiert) bei Raumtemperatur für 2-3 Tage) und sterile Magermilch umrühren und in 6-7 Tassen gießen.

9.2. Mittwoch König-A. Pepton 2 g, Agar-Agar 1,5 g, Glycerin 1,0 g, Kaliumsulfat 1,0 g, Magnesiumchlorid 0,14 g, destilliertes Wasser auf 100 ml, pH 7,2. Bei 112 Grad sterilisieren. C (0,5 kgf / cm²) für 15 Minuten in 6 Tassen gießen.

10. Kochumgebung Turchinsky

Zu 600 ml destilliertem Wasser werden 400 ml Galle, 35-40 g trockener Nähragar, jeweils 5 g Kaliumphosphat monosubstituiert und disubstituiert, 5 g Natriumammoniumphosphat gegeben. Beim Erhitzen schmelzen, in ein Fläschchen gießen und bei 120 Grad sterilisieren. C (1 kgf / cm²) 20 Minuten. Vor der Verwendung in geschmolzenem und abgekühltem Agar auf 100 ml Medium 0,5 g Glucose zugeben. 1 ml einer 1% igen wässrigen Lösung von TTX, 0,6 ml einer 1% igen wässrigen Lösung von Methylenblau (nicht länger als 14 Tage gelagert), 20.000 IE Polymyxin M, 1-2 ml einer 0,1% igen alkoholischen Lösung von Furacilin. Gründlich umrühren, in eine Petrischale mit einer dicken Schicht von 20-25 ml gießen.

11. Vorbereitung der milchhemmenden Umgebung (IIA)

Nähragar 85 ml, sterile Magermilch 15 ml, 0,01% ige Lösung von Kristallwasser lila 1,25 ml, Kaliumtellurit 2% ige wässrige Lösung 1 ml. Alles gut mischen und in Petrischalen gießen.

12. Gregersens Test

Ein einfacher und schneller Weg, um Gram-Farben zu ersetzen, ohne dass eine Optik erforderlich ist.

In einem Tropfen 3% iger KOH-Lösung auf einem Objektträger wird eine Bakterienmasse aus einem dichten Medium emulgiert. Nach einigen Sekunden werden sie durch eine Schleife gerührt, die Aufschlämmung wird aufgelockert und die Schleimfilamente dehnen sich durch die Schleife, was anzeigt, dass die getesteten Mikroorganismen zu den gramnegativen gehören. Bei grampositiven Mikroorganismen ist die Reaktion negativ.

13. Milch nach Tukaev

Zu 1% Peptonwasser werden 5-6% Magermilch gegeben, das Medium wird bei 112 Grad sterilisiert. C (0,5 kgf / cm²) 12 Minuten.

14. Katalase-Test

Ein Tropfen einer 3% igen Wasserstoffperoxidlösung wird auf einen Objektträger aufgetragen und eine Schleife der Testkultur wird aufgetragen. In Gegenwart von Katalase bilden sich Wasserstoffblasen.

15. Herstellung von Milch-Eigelb-Salz-Agar (OIL)

Trockener Nähragar nach Rezeptur auf dem Etikett und 90 g Natriumchlorid werden durch Erhitzen in 1000 ml destilliertem Wasser gelöst, in Gefäße gegossen und bei 120 Grad sterilisiert. Mit 20 Minuten.

Vor Gebrauch auf 50-55 Grad aufgeschmolzen und abgekühlt. Mit Salzagar hinzufügen:

- sterile Magermilch - 60 ml;

- ein Eigelb, gründlich mit 50 ml Kochsalzlösung unter Verwendung von Glasperlen gemischt;

- Polymyxin M (die Lösung wird nicht länger als 14 Tage gelagert) 300.000 U (wenn es ein Fremdwachstum gibt).

Gründlich mischen und in Petrischalen gießen.

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Aufgabe 5: Umgebung für den Anbau von Anaerobier

1. Zeissler-Medium (Glucose-Blut-Agar) in einer Petrischale

2. Mittwoch Kitt-Tarozzi (Zuckerbrühe, Stücke parenchymatöser Organe, hohe Säule, eine Schicht Vaselineöl).

anfänglich mit Wachstum

3. Wilson-Blair-Medium - Eisensulfit-Agar (3% MPA + 1% Glucose + 20% Natriumsulfit + 8% Eisenchlorid) wird in eine Hochsäule auf Vaselineöl gegossen. Ermöglicht die Identifizierung der Schwefelwasserstoffaktivität

anfänglich mit Wachstum.

4. Thioglykol-Medium - es wird sowohl flüssig als auch halbflüssig und dicht verwendet.

5. Milch nach Tukaev (1% Peptonwasser + 5% Magermilch) dient zum Nachweis der proteolytischen Aktivität von Bakterien.

Arbeit 6: Wachstum von Anaerobier beim Aussäen auf Milch.

Die meisten Anaerobier verursachen Blutungen.

Um einen Abstrich mit einer sterilen bakteriologischen Schleife herzustellen, entnehmen Sie den Inhalt des Röhrchens aus dem Boden des Röhrchens. Gramm Fleck. Clostridien sind große Gram-Sticks (+) mit ungefärbten terminalen oder subterminalen Sporen.

Arbeit Nummer 7: Die Zuordnung der Reinkultur von Anaerobier.

Stufe I Untersuchung des zu untersuchenden Materials: a) Mikroskopie, b) Animpfen in 5 Reagenzgläsern mit Kitt-Tarozzi-Medium (unmittelbar nach Erhitzen in einem Wasserbad bei t 80 0 C für 15-20 min und schnellem Abkühlen).

Stufe II. Die Untersuchung der Kulturgüter (die Art der Veränderungen in der Umwelt von Kitt-Tarozzi) und die Gewinnung isolierter Kolonien nach der Methode von Weinberg (Verdünnung in geschmolzenem Zuckeragar, gefolgt von Einbringen in Röhrchen Weyon-Vignale) -

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Morphologie, Physiologie, Genetik und Ökologie von Mikroorganismen (S. 4)

2. Plasmocoagulase - kollabiert Plasma.

Die Aussaat erfolgt in 0,5 ml Kaninchenblutplasma.

3. Hämolysin - Toxin, das rote Blutkörperchen abbaut.

Bestimmt auf Blutagar (CA)

4. Fibrinolizin - Toxin, schmelzendes Fibrin.

Bestimmt durch Aussaat in geronnenes Blut.

Blutgerinnsel Lyse-Gerinnsel

Arbeit Nr. 4: Wege zur Schaffung anaerober Bedingungen.

Prinzip der Peretz-Methode:

Fortner-Methode Prinzip:

Tubes Veyon-Vinyal Prinzip:

Aufgabe 5: Umgebung für den Anbau von Anaerobier

1. Zeissler-Medium (Glucose-Blut-Agar) in einer Petrischale

2. Mittwoch Kitt-Tarozzi (Zuckerbrühe, Stücke parenchymatöser Organe, hohe Säule, eine Schicht Vaselineöl).

anfänglich mit Wachstum

3. Wilson-Blair-Medium - Eisensulfit-Agar (3% MPA + 1% Glucose + 20% Natriumsulfit + 8% Eisenchlorid) wird in eine Hochsäule auf Vaselineöl gegossen. Ermöglicht die Identifizierung der Schwefelwasserstoffaktivität

anfänglich mit Wachstum.

4. Thioglykol-Medium - es wird sowohl flüssig als auch halbflüssig und dicht verwendet.

5. Milch nach Tukaev (1% Peptonwasser + 5% Magermilch) dient zum Nachweis der proteolytischen Aktivität von Bakterien.

Arbeit 6: Wachstum von Anaerobier beim Aussäen auf Milch.

Die meisten Anaerobier verursachen Blutungen.

Um einen Abstrich mit einer sterilen bakteriologischen Schleife herzustellen, entnehmen Sie den Inhalt des Röhrchens aus dem Boden des Röhrchens. Gramm Fleck. Clostridien sind große Gram-Sticks (+) mit ungefärbten terminalen oder subterminalen Sporen.

Arbeit Nummer 7: Die Zuordnung der Reinkultur von Anaerobier.

Stufe I Untersuchung des zu untersuchenden Materials: a) Mikroskopie, b) Animpfen in 5 Reagenzgläsern mit Kitt-Tarozzi-Medium (unmittelbar nach dem Erhitzen in einem Wasserbad bei 80 ° C für 15 bis 20 Minuten und schnellem Abkühlen).

Stufe II. Die Untersuchung der Kulturgüter (die Art der Veränderungen in der Umwelt von Kitt-Tarozzi) und die Gewinnung isolierter Kolonien nach der Methode von Weinberg (Verdünnung in geschmolzenem Zuckeragar, gefolgt von Einbringen in Röhrchen Weyon-Vignale) -

oder nach der Methode von Zeissler (Aussaat mit Dissoziation auf Glukose -

Stufe III. Das Studium der Kolonien. Am Mittwoch Kitt-Tarozzi für die Anreicherung von Reinkultur fallen lassen.

Stufe IV. Kultur pur entdecken

a) morphologische und tinktorielle Eigenschaften - von Gram, Hins, Ozheshko gefärbter Abstrich;

b) biochemisch - "bunte" Reihe, Aussaat in Milch, auf Wilson-Blairs Medium usw.,

c) antigene und toxigene Eigenschaften - bei Labortieren.

Stufe V Ergebnisprotokolle Fazit auf dem Formular.

Arbeit Nummer 8: Das Studium ausgewählter Reinkulturen.

1. Kulturelle Eigenschaften:

2. Morphologische und farbtechnische Eigenschaften in Gramm Fleck:

Weitere Informationen.
Fragen zur Selbstkontrolle:

1. Faktoren der Aggression.

2. Enzyme je nach Substrat im Medium.

3. Einteilung der Enzyme nach Wirkrichtung.

4. Verwendung von mikrobiellen Enzymen.

5. Umgebungen zur Identifizierung von Pathogenitätsfaktoren.

6. Zusammensetzung und Zweck der Umwelt JSA.

7. Methoden zur Gewinnung isolierter anaerober Kolonien.

8. Grundsätze zur Schaffung anaerober Bedingungen in der Umgebung von Kitt-Torozzi.

10. Die Methode zur Gewinnung von Energie aus obligaten Anaerobier.

11. Methoden zur Schaffung anaerober Bedingungen.

12. Flüssige Medien zur Kultivierung von Anaerobier.

13. Mittwoch Wilson-Blair.

14. Chemische Methoden zur Schaffung anaerober Bedingungen.

15. In welchen Umgebungen werden isolierte anaerobe Kolonien erhalten?

16. Wie entstehen im Mikroaerostat anaerobe Zustände?

17. Die Endprodukte des Proteinabbaus.

18. Wie lässt sich die Bildung von Schwefelwasserstoff, Indol und Ammoniak nachweisen?

19. Reagenzien zum Nachweis von Schwefelwasserstoff, Indol, Ammoniak.

20. Umgebungen zur Untersuchung der saccharolytischen Eigenschaften von Bakterien.

21. Medien, die Laktose enthalten.

22. Wie sehen Lackkolonien (+) in der Umgebung von Endo, Levin, Ploskirev aus?

23. Die Endprodukte des Kohlenhydratabbaus.

24. Zusammensetzung und Zweck der Umwelt Rappoport.

25. Differenzierende Komponente der Umgebung Rappoport.

26. Umgebungen zur Untersuchung proteolytischer Eigenschaften.

27. Eigenschaften von obligaten Anaerobier.

28. Biologische Methoden zur Schaffung anaerober Bedingungen.

29. Phase-II-Isolierung der Reinkultur von Anaerobier.

30. Umgebung für den Anbau von Anaerobier (flüssig und dicht).

31. Chemische Methoden zur Schaffung anaerober Bedingungen.

32. Zweck und Wirkungsweise der Veyon-Vignal-Röhren.

33. Welche Bakterien können ohne Sauerstoff existieren?

34. Umgebung für den Anbau von Anaerobier.

35. Wie entstehen im Exsikkator anaerobe Bedingungen?

36. Zusammensetzung und Verwendung von Blutagar.

37. II I Stadium der Isolierung der Reinkultur von Anaerobier.

38. Zusammensetzung und Zweck der Umwelt Zeissler.

39. Wie anaerobe Bedingungen in der Fortner-Methode geschaffen werden.

40. Die Prinzipien anaerober Bedingungen in der Umgebung von Kitt-Torozzi.

Laborstunde Nummer 7

Thema: Kultivierung und Indikation von Viren.

Ziel: Die Methoden zur Kultivierung und Anzeige von Viren zu assimilieren,

Methoden zur Gewinnung und Titration von Bakteriophagen und deren

FRAGEN ZUR AUSBILDUNG:

1. Der Wert der Entdeckung. Entwicklungsstadien der Virologie, die Rolle der einheimischen Wissenschaftler bei der Entwicklung der Virologie.

2. Struktur und chemische Zusammensetzung von Viren und Bakteriophagen.

3. Arten der Virusinteraktion mit der Zelle, Fortpflanzungsstadien, Ergebnisse.

4. Methoden zur Kultivierung von Viren. Hinweis auf Viren.

5. Bakteriophagen. Phagenwechselwirkung mit der Zelle. Gemäßigte und virulente Phagen. Lysogenie

6. Produktion und Titration von Phagen. Die Verwendung von Phagen in der Medizin, Mikrobiologie und Biotechnologie.

7. Intraspezifische Identifizierung von Bakterien (Biovare, Serovare, Phagovare usw.). Epidemie-Kennzeichnung.

1. Ovoskopie eines Hühnerembryos, infizieren Sie es

geimpftes Material. Führen Sie eine Autopsie eines zuvor infizierten Embryos durch und überprüfen Sie den Zustand der Membranen.

2. Beschreiben Sie die Arten der Zellkulturen und deren Unterschiede.

3. Untersuchung von Nährmedien für Zellkulturen: Hanks, Needle, 199.

4. So untersuchen und skizzieren Sie die Methoden zum Anzeigen von Viren:

a) zytopathische Wirkung - Mikroskopie und Skizze von Kulturen von Fibroblasten im Normalzustand und mit dem JRS;

b) Hämagglutinationstest - Setzen Sie den RSA ein, um das Virus im Testmaterial anzuzeigen, zu bewerten und zu skizzieren.

c) Hämadsorptionsreaktion - Aus der Tabelle entnehmen;

d) Einschlüsse in betroffenen Zellen - Skizzieren von Babesh-Negri-Kalb mit Tollwut, Guarnieri-Kalb mit Pocken, intranukleäre Einschlüsse mit adenoviraler Infektion aus Tabellen;

e) Reaktion der Plaquebildung - aus der Tabelle;

f) „Farbtest“ - um die fertige Reaktion zu skizzieren und zu bewerten.

5. Zerlegen Sie die Strukturelemente und skizzieren Sie die Struktur

6. Beschreiben Sie die Methode zur Gewinnung von Bakteriophagen.

7. Betrachten und skizzieren Sie die Ergebnisse der Appelman-Phagentitration

8. Berücksichtigen und skizzieren Sie die Endergebnisse der Phagodiagnostik: Reaktionen

Phagolyse und Phagotypisierung.

9. Beschreiben Sie die zur Diagnose und Behandlung verwendeten Phagenpräparate

und Krankheitsprävention.

10. Arbeitsplatz reinigen.

11. Protokollsicherheit.

Arbeit Nummer 1: Die Technik der Ovoskopie, Infektion und Öffnung Huhn

Ovoskopie: Legen Sie den Embryo auf das Ovoskop und markieren Sie die Grenze der Lufthöhle mit einem Bleistift.

Die Struktur des 12-Tage-Hühnerembryos

luft chorion - allantoic

Hohlraumschale (HAO)

allantoische Embryonenhöhle

Fruchtwasser Dottersack

Infektion: Die Hülle über dem Luftraum wird mit Alkohol abgewischt, am Feuer verbrannt, mit 2% iger Jodtinktur bestrichen, erneut mit Alkohol abgewischt und verbrannt. Um XAD mit einer gekrümmten Schere zu infizieren, schneiden Sie die Hüllen über den Luftraum, entfernen Sie einen Teil der Membranhülle mit einer Pinzette. Das zu untersuchende Material mit einem Volumen von ________ wird auf XAO aufgetragen (das Nadelende sollte nicht unterhalb der Luftraumgrenze liegen). Das Loch in der Schale ist mit einem Deckglas abgedeckt und mit Wachs oder Paraffin gefüllt.

Zur Infektion wird die Spritzennadel durch einen Einstich in der Schale in die Allantoishöhle eingeführt, so dass das Nadelende um ______ niedriger ist als das Niveau der Lufthöhle. Das Loch in der Schale wird mit Wachs gegossen.

Das Öffnen von Hühnerembryonen erfolgt nach den Regeln der Asepsis. Die Hülle über der Lufthöhle wird auf die gleiche Weise wie während der Infektion behandelt und mit einer Schere knapp über der Grenze der Befestigung der Chorion-Allantoic-Membran geschnitten. Den Zustand des HAO visuell beurteilen (Trübung, Vorhandensein von Plaques usw.). Allantoisflüssigkeit, die mit einer Pipette nach dem Durchstechen von HAO an einem Ort ohne große Blutgefäße angesaugt wurde. Dann schnitt HAO mit einer Schere und goss den gesamten Inhalt in eine Petrischale durch das Loch. Der Fruchtblasenbeutel wird ebenfalls geschnitten, vom Embryo befreit und auf Läsionen untersucht.

Arbeit Nr. 2: Zellkultur zur Kultivierung von Viren.

http://pandia.ru/text/79/367/40408-4.php

Arbeit Nr. 4: Wege zur Schaffung anaerober Bedingungen

Peretz-Methode Prinzip:

Fortner-Methode Prinzip:

Horovets-Vlasov-Methode

Vejon-Vignal-Röhren Prinzip:

Aufgabe 5: Umgebung für den Anbau von Anaerobier

1. Medium Zeissler (Glucose - Blutagar) in einer Petrischale

2. sredKita-Tarozzi (Zuckerbrühe, Stücke parenchymatöser Organe, hohe Säule, eine Schicht Vaselineöl).

anfänglich mit Wachstum

3. Wilson-Blair-Medium - Eisensulfit-Agar (3% MPA + 1% Glucose + 20% Natriumsulfit + 8% Eisenchlorid) wird in eine Hochsäule auf Vaselineöl gegossen. Ermöglicht die Identifizierung der Schwefelwasserstoffaktivität

anfänglich mit Wachstum.

4. Thioglykol-Medium - wird als Flüssigkeit verwendet und ist halbflüssig und dicht.

5. Milch nach Tukaev (1% Peptonwasser + 5% Magermilch) dient zum Nachweis der proteolytischen Aktivität von Bakterien.

Arbeit 6: Wachstum von Anaerobier beim Aussäen auf Milch

Die meisten Anaerobier verursachen Blutungen.

Um einen Abstrich mit einer sterilen bakteriologischen Schleife herzustellen, entnehmen Sie den Inhalt des Röhrchens aus dem Boden des Röhrchens. Gramm Fleck. Clostridien sind große Gram-Sticks (+) mit ungefärbten terminalen oder subterminalen Sporen.

Arbeit Nr. 7: Schemaaufteilung der Reinkultur von Anaerobier

Stufe I Untersuchung des zu untersuchenden Materials: a) Mikroskopie, b) Animpfen in 5 Reagenzgläsern mit Kitt-Tarozzi-Medium (unmittelbar nach Erhitzen in einem Wasserbad bei t 80 0 C für 15-20 min und schnellem Abkühlen).

Stufe II. Die Untersuchung der Kulturgüter (die Art der Veränderungen in der Umwelt von Kitt-Tarozzi) und die Gewinnung isolierter Kolonien nach der Methode von Weinberg (Verdünnung in geschmolzenem Zuckeragar, gefolgt von Einbringen in Röhrchen Weyon-Vignale) -

oder nach der Methode von Zeissler (Aussaat mit Dissoziation auf Glukose -

Stufe III. Das Studium der Kolonien. Am Mittwoch Kitt-Tarozzi für die Anreicherung von Reinkultur fallen lassen.

Stufe IV. Kultur pur entdecken

a) morphologische und tinktorielle Eigenschaften - von Gram, Hins, Ozheshko gefärbter Abstrich;

b) biochemisch - "bunte" Reihe, Aussaat in Milch, auf Wilson-Blairs Medium usw.,

c) antigene und toxigene Eigenschaften - bei Labortieren.

Stufe V Abrechnungsergebnisse. Fazit zum Formular.

Arbeit Nummer 8: Das Studium der reinen Kultur, gewidmet

Bei der Durchführung von UIRS

1. Kulturelle Eigenschaften:

2. Morphologische und farbtechnische Eigenschaften in Gramm Fleck:

Fragen zur Selbstkontrolle:

1. Faktoren der bakteriellen Aggression.

2. Enzyme je nach Substrat im Medium.

3. Einteilung der Enzyme nach Wirkrichtung.

4. Verwendung von mikrobiellen Enzymen.

5. Umgebungen zur Identifizierung von Pathogenitätsfaktoren.

6. Zusammensetzung und Zweck der Umwelt JSA.

7. Methoden zur Gewinnung isolierter anaerober Kolonien.

8. Grundsätze zur Schaffung anaerober Bedingungen in der Umgebung von Kitt-Torozzi.

9. Was ist Gärung?

10. Die Methode zur Gewinnung von Energie aus obligaten Anaerobier.

11. Methoden zur Schaffung anaerober Bedingungen.

12. Flüssige Medien zur Kultivierung von Anaerobier.

13. Mittwoch Wilson-Blair.

14. Chemische Methoden zur Schaffung anaerober Bedingungen.

15. In welchen Umgebungen werden isolierte anaerobe Kolonien erhalten?

16. Wie entstehen im Mikroaerostat anaerobe Zustände?

17. Die Endprodukte des Proteinabbaus.

18. Wie lässt sich die Bildung von Schwefelwasserstoff, Indol und Ammoniak nachweisen?

19. Reagenzien zum Nachweis von Schwefelwasserstoff, Indol, Ammoniak.

20. Umgebungen zur Untersuchung der saccharolytischen Eigenschaften von Bakterien.

21. Medien, die Laktose enthalten.

22. Wie sehen Lackkolonien (+) in der Umgebung von Endo, Levin, Ploskirev aus?

23. Die Endprodukte des Kohlenhydratabbaus.

24. Zusammensetzung und Zweck der Umwelt Rappoport.

25. Differenzierende Komponente der Umgebung Rappoport.

26. Umgebungen zur Untersuchung proteolytischer Eigenschaften.

27. Eigenschaften von obligaten Anaerobier.

28. Biologische Methoden zur Schaffung anaerober Bedingungen.

29. Phase-II-Isolierung der Reinkultur von Anaerobier.

30. Umgebung für den Anbau von Anaerobier (flüssig und dicht).

31. Chemische Methoden zur Schaffung anaerober Bedingungen.

32. Zweck und Wirkungsweise der Veyon-Vignal-Röhren.

33. Welche Bakterien können ohne Sauerstoff existieren?

34. Umgebung für den Anbau von Anaerobier.

35. Wie entstehen im Exsikkator anaerobe Bedingungen?

36. Zusammensetzung und Verwendung von Blutagar.

37. Stadium III Isolierung der Reinkultur von Anaerobier.

38. Zusammensetzung und Zweck der Umwelt Zeissler.

39. Wie entstehen bei der Fortner-Methode anaerobe Bedingungen?

40. Die Prinzipien anaerober Bedingungen in der Umgebung von Kitt-Torozzi.

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